透析袋原理是什么?根据分子量筛选使用方法详细介绍读完就会用了

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时间:2022-09-15 16:41:47 作者:ob欧宝最新地址 来源:OB欧宝网页登录

  大佬也可以不用,有些,冷甲醇析出也可以呀,但是透析方法还是很常用的,下来介绍一下透析原理以及方法,操作中有哪需要注意的,避免浪费时间。

  透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。

  透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。

  1)把适量的透析液(缓冲液)加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的100倍。(例如,在1L透析液中透析10ml的样品)

  2)裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度(约占总样品体积量的20%)作为头部空间。

  3)把透析管插入打开的透析夹,在约超出透析夹3-5mm的位置再夹住。不要折叠透析袋。

  6)透析要根据具体的应用需求。通常情况下,允许过夜透析。在持续透析的过程中,至少要进行3次全部更换透析液。建议在(透析后)2-4小时,6-8小时和10-14小时(第二天早晨)更换透析液。在最后一次透析液的更换后,要至少继续进行2小时的透析。

  注意:对于高浓度污染物,样品可能需要较长的时间透析,透析液需要更频繁的更换。

  7)透析温度主要取决于样品。温度最高限制主要取决于膜的类型。纤维素透析袋可以承受的温度高达37℃。再生纤维素透析袋可以承受的温度高达60℃。

  透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素(再生纤维素 RC、纤维素酯CE、PVDF等)制成的透析膜,目前常用的是美国光谱医学公司(spectrum)和美国联合碳化物公司(union carbide)生产的各种尺寸的透析管。截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。截留分子量越大也就是说透过性越大,一般而言,透析袋截留分子量越小价格越贵,因为截留的分子越小要求透析袋越密,价格越贵。商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8mm-77mm不等。

  半透膜制成的透析袋作为工具,存在透析时间长、样品回收率不高、无法处理微量样品的难题。目前已有专为10到100ul的微量样品透析而设计的透析工具。把样品加在平底的透析管(类似小量提质粒的离心纯化柱,可以插入1.5ml的离心管中,管底是半透膜)中,再插入特制的浮板(浮漂)中,置于缓冲液面10min即完成透析。实验表明,100ul pH2.8的IgG洗脱液在1L pH9.4的缓冲液中只需不到10min即可平衡到pH9.4。如果在装缓冲液的烧杯底加磁力棒搅拌则更能加速透析速度。这种方法有较高的回收率,能够节约珍贵的样品,并能节约时间,特别适合摸条件的预实验。

  每种膜对不同的分子具有不同的亲和性。对于球蛋白,相对的结合亲和性由低到高为CE<RC<PVDF。

  为防干裂,出厂前透析袋一般都经10%的甘油处理,透析袋中含有微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其他生物活性物质有害,用前必须除去。新购进的普通型透析袋必须经过处理才能使用。处理方法如下。

  冷却后,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时其取用透析袋必须戴手套。

  可先用50%乙醇煮沸1h,再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH=8.0)溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用。

  实验要求不高的可以用简易方法处理。用沸水煮5至10min,再用蒸馏水洗净,即可使用。

  不过现在也有杂质含量极少,无需预处理,只需用去离子水清洗即可使用的即用型透析袋。这种透析袋具有特殊的生物技术膜,不含硫化物及金属杂质。只是比普通型透析袋稍贵。

  大多数情况下,透析袋纯化的样品会被稀释。如果下游需要的样品浓度比较高时,可能需要对样品进行浓缩。透析袋本身浓缩的方法如下。

  (1)吹干浓缩法:将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹。此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15℃。

  (2)透析袋浓缩法:利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。

  主要用于更换蛋白质的缓冲液,得有透析袋。不需要特殊的仪器。一般用得是PEG20000进行实验,简单,快速,对蛋白没什么影响。